豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

更新時間：2020-07-27

瀏覽次數：1986

　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程如下：

　　（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

　　（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　　（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

　　（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

　　介紹一下豚鼠ELISA試劑盒實驗操作的常見問題。

　　一、一次ELISA實驗需要多長時間？

　　雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。

　　二、血清樣本如何處理？

　　全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　三、血漿樣本如何處理？

　　建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　四、細胞上清液樣本如何處理？

　　檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細收集上清。

成人动漫综合网丨中文字字幕在线中文乱码丨成熟女人牲交片免费观看视频丨亚洲精品久久久久久动漫器材一区丨理论片午午伦夜理片影院